生物选修一-微生物的培养

稀释涂布平板法

一种简单快速的微生物培养方法，具体步骤如下

1.稀释

将分别盛有9ml水的6支试管灭菌（使用高压蒸汽灭菌法），并按1到6的顺序进行编号。（此处数字表示稀释度的指数）
用移液管吸取1ml培养的菌夜，注入10倍稀释的试管（1号）中。
混匀后，从10倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入100倍稀释的试管（2号）中，重复第3步的混匀操作。
依次类推，直达完成最后一支试管的稀释。

2.涂布

不同的微生物培养有不同的稀释度。一般真菌培养稀释度在100-10K之间，放线菌在1K-100K之间，细菌在10K-1M之间。
在火焰旁操作以防止杂菌污染。用移液管吸取0.1mL稀释好的菌液，滴在平板上，用火焰灼烧并冷却过的涂布器均匀涂开。（注：此处涂布器的灼烧可以把涂布器在75%乙醇溶液内浸没拿出后点燃）
把涂布好的平板放在合适的条件下培养，此处需要留出一个不涂布的平板测试培养基是否完全灭菌。
注意：如果作为空白对照的平板出现菌落，则说明这一批平板已经被杂菌污染，应该全部灭菌后废弃。

平板划线法

平板划线分离法是把混杂在一起的微生物或同一种微生物群体中的不同细胞用接种环在培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生成繁殖成单菌落。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次做“由点到线”稀释而达到分离目的。

1.消毒

把手用酒精（75%）擦拭消毒

2.准备

点燃酒精灯（r=3-5cm内为无菌区），拿出准备好的平板

3.灼烧

右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。

4.接种

用冷却的接种环取菌液，在平板上划3-5条平行线，取出接种环，灼烧冷却后在上一条线的末端再次划线，总共划5次。

5.培养

倒置培养

6.注意事项

1.应该拿出一个平板不接种作为空白对照
2.操作时小心烫手
3.接种环必须彻底冷却防止烫死细菌